XWARIN. Chudinova, V.A. Platonov, A.V. Alexandrova, S.N. Elansky
Di van demên dawî de hate destnîşan kirin ku fungusê ascomycete Ilyonectria crassa dikare êrîşî guliyên kartol bike. Ev xebat yekem bû ku taybetiyên biyolojîkî û berxwedana li hember hin fungîsîdên I. crassa ku ji kartol tê veqetandin analîz kir. Rêzên herêmên curbecur ên cureya "patata" bi yên ku berê ji bo funkên ku ji kokên nêrgizê, ginseng, aspen û behîv, ampûlên sosinê û pelên laleyan hatine veqetandin, li hev hatin. Xuya ye, gelek nebatên çolê û bexçe dikarin ji bo I. crassa bibin rezervan. Cûreya lêkolînê perçeyên tomato û kartolê vegirt, lê fêkiyek tomato an jî guliyek kartolê saxlem negirt. Ev nîşan dide ku I. crassa parazîteke birînê ye. Nirxandina berxwedana li hember fludioxonil, difenoconazole û azoxystrobin li ser navgînek xurek bandora bilind a van dermanan destnîşan kir.
Nîşana EC50 (kombûna fungîsîdê ku bi rêjeya mezinbûna radîkal a koloniyê li gorî kontrola ne-fungicide 2 qatan kêm dike) wekhev bû 0.4; 7.4 û 4 mg/l, bi rêzê ve. Di dema nirxandina fîtopatolojîkî ya lûleyên kartol û pêşxistina tedbîrên parastina nebatan de divê îhtîmala peydabûna nexweşiyek ku ji hêla I. crassa ve hatî çêkirin were girtin.
Pêşkeftina mîkroorganîzmayên fîtopatogenîk di hemî qonaxên çandinî û hilanîna kartol de dibe sedema windahiyên mezin. Dema ku tedbîrên parastinê têne plansaz kirin, wekî qaîdeyek, pathogenên naskirî têne hesibandin, wekî celebên celebên Alternaria, Fusarium, Phoma, Helminthosporium, Colletotrichum, Phytophthora, hwd. Lêbelê, di van salên dawî de, raporên pir zêde derketine. li ser xuyabûna mîkroorganîzmayên fîtopatogenîk ên nû li ser kartol. Biyolojiya wan kêm hatiye lêkolîn kirin, bandora fungicîdên ku li ser kartol li dijî wan têne bikar anîn nayê zanîn, û rêbazên teşhîs nehatine pêşve xistin. Dema ku bi girseyî têne pêşve xistin, ew dikarin zirarek girîng bidin çandiniya kartol. Yek ji van mîkroorganîzmayan fungusê ascomycete Ilyonectria crassa (Wollenw.) A. Cabral & Crous e, ku yekem car ji hêla nivîskaran ve li ser çîpên kartolê hate keşif kirin (Chudinova et al., 2019).
Ev kaxez encamên analîzek li ser stûna I. crassa ya ku ji gulikê kartol hatiye veqetandin pêşkêş dike. Morfolojiya kolonî û strukturên mycelial ên I. crassa, rêzikên nukleotîdan ên beşên DNA yên taybetmendiya cureyan, nexweşiya kartol û tomato, û berxwedana li hember hin fungicîdên populer hatin lêkolîn kirin.
Materyal û rêbaz
Cûreya ku di vê xebatê de tê bikar anîn I. crassa 18KSuPT2 ye, ku di sala 2018-an de ji gulikê kartolê yê vegirtî ku li herêma Kostromayê mezin bûye, hatiye veqetandin. Tîrêj bi ziwabûna ziwa ya bi valahiya ku bi mîcelîyûmê qehweyî yê sivik pêgirtî bandor bû. Bi karanîna derziyek veqetandî ya sterîl, mîcelîyûmê fungal di nav firaqek Petri de bi navgînek agar (birra bîr 10%, agar 1.5%, penîsîlîn 1000 yekîneyên/ml) hate veguheztin. Xwarin di tariyê de di germahiya 24 derece de hatin vehewandin.
Ji bo wênekêşandinê, nirxandina mezinahî û morfolojiya spor û organên sporkirinê, mîkroskopa ronahiyê Leica DM2500 bi kamerayek dîjîtal ICC50 HD û mîkroskopa dûrbîn a Leica M80 bi kamerayek dîjîtal IC80HD (Leica Microsystems, Almanya) hate bikar anîn.
Ji bo veqetandina ADN-ê, mîcelîyûmê fungal di navgîniya peasê de hate mezin kirin, dûv re di nîtrojena şil de hate cemidandin, homojen kirin, di tampon CTAB de hate înkubakirin, bi kloroformê hate paqij kirin û du caran bi alkolê %2 hate şûştin.
Rêbaza derxistina DNA bi berfirehî di gotara Kutuzova et al. (2017).
Ji bo destnîşankirina nasnameya cureyan bi rêbazên molekulî û danberheva bi cureyên din ên naskirî yên I. crassa re, PCR bi primerên ku destûr didin zêdekirina herêmên DNA yên taybetmendiya cureyan hate kirin: ITS1-5,8S-ITS2 (primers ITS5/ITS4, White et al., 1990), herêmên genên b -tubulîn (Bt2a/Bt2b, Glass and Donaldson, 1995) û faktora dirêjkirina wergerandinê 1α (tef1α) (primerên EF1-728F/EF1-986R, Carbone and Kohn, 1999). Amplikonên bi dirêjahiya pêwîst ji gêlê bi karanîna kîtê CleanUp ji Evrogen hatin derxistin. Deverên zêdekirî bi karanîna BigDye®Terminator v3.1 Kita Rêzkirina Sîklê (Applied Biosystems, CA, USA) li ser sequencerek otomatîkî ya Applied Biosystems 3730 xl (Applied Biosystems, CA, USA) hatin rêzkirin. Rêzên nukleotîd ên hatine bidestxistin ji bo lêgerîna lihevhatinek di databasa GenBank ya Navenda Neteweyî ya Dewletên Yekbûyî ya Agahdariya Biyoteknolojiyê (NCBI) de hatine bikar anîn. Analîza fîlogenetîkî bi karanîna bernameya MEGA 6 hate kirin (Tamura et al., 2013).
Tesbîtkirina vîrusê li ser tevahî fêkiyên kesk ên tomatoyên fêkî yên mezin (cûrbecûr Dubrava) û çîpên kartol (cûrbecûr Gala) hate kirin. Wekî din, ji bo simulasyona zirarê li fêkî û çîkalên zirardar, perçeyên heman fêkî û çîkalan hatine bikar anîn. Parçeyên gulikê di odeyên şil de hatin danîn, ku sêlên Petri bi kaxeza parzûnê ya şil li jêrê bûn. Li ser kaxezê şûşek şûşek hate danîn, li ser wê, pariyên çîp an fêkiyan hatin danîn. Tevahiya çîp û fêkî jî di konteynerên bi kaxizên parzûnê yên şil de li jêr hatine danîn. Parçeyek agar (5 × 5 mm) bi hîfên fungal piştî 5 rojan ji çandiniya li ser agarê mêşhingî li navenda perçê (an li ser rûbera saxlem a çîçek an fêkî) bi hîfên fungal hate danîn.
Berxwedana cureyên fungalê li hember fungîsîdan di şert û mercên laboratîfê de li ser navgînek xurek agarê hate nirxandin. Me hesasiyeta li hember dermanên fungicidal Maxim, KS (maddeya çalak fludioxonil, 25 g/l), Quadris, KS (azoxystrobin 250 g/l), Skor, CE (difenoconazole 250 g/l) lêkolîn kir (Kataloga Dewletê..., 2020 ). Nirxandin di sêlên Petri de li ser navgîniya wort-agar bi lêzêdekirina dermanên lêkolînkirî bi giraniya maddeya çalak 0.1 hate kirin; 1; 10 ppm (mg/l) (ji bo fludioxonil û difenoconazole), 1; 10; 100 ppm (ji bo azoxystrobin) û li ser navgînek bê fungicide (kontrol). Fungîsîd li navgîna helkirî û sar 60 °C hate zêdekirin, pişt re navgîn di nav firaqên Petri de hate rijandin. Blokek agar a bi mîçelyûmê fungalî li navenda firaqek Petri hate danîn û di tariyê de di germahiya 24 °C de hate çandin. Piştî 7 rojên înkubasyonê, pîvanên koloniyan di du rêgezên perpendîkular de hatin pîvandin; encamên pîvandinê yên ji bo her koloniyek navîn bûn. Ceribandin sê caran hatin kirin. Li ser bingeha encamên testê, nîşana EC50 hate hesab kirin, ku bi berhevdana fungicide re wekhev e ku rêjeya mezinbûna radial a koloniyê li gorî kontrola ne-fungicide nîvî kir.
Encam û nîqaş
Li ser xwarinên Petri yên bi wort agar, fungus bi mîcelîyûmên spî yên spî kolonî ava kirin. Navgîna bin mîceliumê sor-qehweyî bû. Dema ku navgîn zuwa bû, fungus li ser yek konidioforên yekane du celeb spor û yên ku di nav sporodochiumên piçûk de têne berhev kirin ava kirin. Makrokonîdiyên dirêjkirî ne, silindrîk, bi yek û sê septa, dirêjahiya navîn 27.2 μm bi rêzek nirxan ji 23.2 heta 32.2 μm, firehî - heya 4.9 μm (Hêjî. 1). Dirêjahiya navînî ya mîkrokonîdyayê 14.3 μm ye bi rêzek nirxan ji 10.3 heta 18.1 μm, firehî - heya 4.0 μm. Hemî karakterên makro- û mîkromorfolojîk di nav rêza cûrbecûr celebê Ilyonectria crassa de ne (Cabral et al., 2012).
Rêzên herêmên DNA-ya-taybetî (ITS, b-tubulin, TEF 1α) bi tevahî bi rêzikên cûreyên I. crassa yên ku me berê lêkolîn kiribûn re hevaheng bûn (Chudinova et al., 2019, Tablo 1). Ji bo lêkolîna belavbûna I. crassa li herêmên din û analîzkirina spektruma zeviyên bandorbûyî, rêzikên DNA yên wekhev di databasa GenBank de hatin analîz kirin (Table 1). Hevgirtin ji 86 heta 100% bû. Rêzên her sê herêmên DNA yên cureya "patata" ya I. crassa bi rêzikên cureyên ku ji ampûlên sosinan û kokên nêrgizê yên li Holandayê û ji koka ginsengê li Kanadayê veqetandî ne yek bûn. Me nikarîbû bi sê rêzikên wekhev ên analîzkirî di databasên vekirî de ti cûreyên I. crassa yên din bibînin. Lêbelê, analîza rêzikên ITS û b-tubulîn ên razayî hebûna I. crassa li ser pelên laleyan li Keyaniya Yekbûyî eşkere kir. Kêçikên bi rêzek ITS-ê ya wekhev dema analîzkirina mycobiota kokên aspenê li Kanada û behîv li Italytalya, û çîpên kartol li Erebistana Siûdî hatin tesbît kirin (Table 1). Encamên vê lêkolînê diyar dikin ku I. crassa xwedan belavbûnek gerdûnî ye û dikare êrişî cureyên nebatan bike.
Dema ku di roja 5-an de patojenîtiya li ser pariyên tomato û kartolê hate destnîşankirin, pîvana birînê gihîşt 1.5 cm. Di heman demê de, çenga lêkolînkirî fêkiyek tomato û çîçeka kartolê saxlem negirt. Lêbelê, zirara sepalan li ser tomato hate dîtin. Ji bo ku îhtîmala gemariyê nehêle, îzolasyonek fungalî di nav çandek paqij de ji mîcelîyûmê ku li ser perçeyek gulikê kartol pêşketiye hate veqetandin. Ew bi tevahî bi şikilê dêûbav re wekhev bû. I. crassa wekî parazîta birînê xuya dike.
Tedawiya berî çandiniyê ya çîpên tov bi fungicides dikare pêşveçûna nexweşiyên li ser nebatan di demsala mezinbûnê de kêm bike. Ji bo hilbijartina fungicîdên bi bandor, girîng e ku meriv binirxîne ka kîjan li dijî I. crassa bandorker in. Xebatê malzemeyên çalak ên ku bi berfirehî têne bikar anîn fungicides - fludioxonil, azoxystrobin, difenoconazole lêkolîn kirin. Fludioxonil beşek ji çend amadekariyên tevlihev e ku ji bo dermankirina tov û tovên tov berî çandiniyê têne bikar anîn. Fludioxonil (Maxim) di heman demê de ji bo dermankirina çîpên tovê berî hilanînê jî tê bikar anîn. Difenoconazole û azoxystrobin di heman demê de di hejmarek amadekariyên ku ji bo hilberandina materyalê tovê têne bikar anîn, û her weha di amadekariyên ku ji bo hilberîna nebatên nebatî têne bikar anîn de (Kataloga Dewletê ..., 2020) hene.
Rêjeya mezinbûna I. crassa li ser medyayê (Hêjî. 2) bi hûrgelên cûda yên pêkhateyên çalak hate lêkolîn kirin: fludioxonil (EC50 = 0.4 ppm), azoxystrobin (EC50 = 4 ppm) û difenoconazole (EC50 = 7.4 ppm) (Table 2) . Van dermanan dikarin li dijî I. crassa pir bibandor bêne hesibandin, ji ber ku EC50-ya wan bi girîngî kêmtir e ji berhevdana dermanê pêşniyarkirî ya di şilava xebitandinê ya ku ji bo dermankirina boriyan tê bikar anîn. Li gorî Kataloga Dewletê ... (2020), hûrbûna fludioxonil di şilavê de ji bo dermankirina çîpên kartol ji 500 heta 1000 ppm, azoxystrobin (di şilava ji bo dermankirina binê qulikê de) - 3750–9375 ppm, difenoconazole. (di şilava ji bo dermankirina nebatên nebatî de) - 187.5- 625 ppm.
Tablo 1. Wekheviya rêzê di navbera rêzikên cûrbecûr ên çenga 18KSuPT2 û Ilyonectria crassa de di databasa Genbank de hene
Kedxwarî | Riweka mêhvan, cihê derçûyê | Hejmarên rêzikan li GenBank hatine razandin, ji sedî wekheviyê | link | ||
ITS | β-tubulîn | TEF 1α | |||
17KSPT1û 18KSuPT2 | Tuberê kartol, herêma Kostroma. | MH818326 | MH822872 | MK281307 | Chudinova et al., 2019, ev xebat |
CBS 158/31 | Kokên Nêrgiz, Hollanda | JF735276 100 | JF735394 100 | JF735724 99.3 | Cabral et al., 2012 |
CBS 139/30 | ampûlê sosinê, Hollanda | JF735275 100 | JF735393 99.7 | JF735723 99.3 |
|
NSAC-SH-1 | Roka Ginseng, Kanada | AY295311 99.4 | JF735395 100 | JF735/725 99.6 |
|
RHS235138 | pelê Lale, UK | KJ475469 100 | KJ513266 100 | ND | Denton, Denton, 2014 |
MT294410 | Rokên Aspen, Kanada | MT294410 100 | ND | ND | Ramsfield et al., 2020 |
ER1937 | Buc, Îtalya | KR019363 99.65 | ND | ND | Tizzani, Haegi, Motta. Radestkirina rasterast |
KAUF19 | Tuberê kartol, Erebistana Siûdî | HE649390 98.3 | ND | ND | Gashgari, Gherbawy, 2013 |
ND = nayê razandin
Tablo 2. Berxwedana Ilyonectria crassa li hember fungicides
(maddeya çalak) | EC50, ppm | ||||
Roja 3 | Roja 5 | Roja 7 | |||
Control | 17 ± 2 | 33 ± 5 | 47 ± 3 | ||
Quadris, KS (fzoxystrobin) | 18 ± 1 | 34 ± 2 | 48 ± 2 | ||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
Maxim, KS (fludioxonil) | 16 ± 1 | 28 ± 2 | 48 ± 2 | ||
7 ± 1 | 13 ± 3 | 19 ± 4 | |||
5 ± 1 | 12 ± 1 | 17 ± 5 | |||
Pûan, EC (difenoconazole) | 18 ± 1 | 35 ± 2 | 48 ± 1 | ||
11 ± 1 | 24 ± 3 | 35 ± 4 | |||
11 ± 1 | 13 ± 1 | 17 ± 3 |
Di xebata me de, cûreyên I. crassa ji guliyên kartol ên li herêmên Kostroma û Moskowê hatin veqetandin (Chudinova et al., 2019). Rêjeyek bilind a çelekên fungî yên bi rêzikên ITS yên mîna I. crassa, dema ku li Erebistana Siûdî mycobiota lûleyên kartolê hate analîz kirin hate nas kirin (Gashgari and Gherbawy, 2013). Xuya ye, I. crassa li ser kartol ne ewqas kêm e ku ew xuya dike. Ceribandinên me nîşan da ku fungus dikare fêkiyên tomato yên zirardar bikişîne. Ji edebiyatê tê zanîn ku I. crassa dikare bi rengek saprotrofî di axê de pêş bikeve (Moll et al., 2016), û her weha cûrbecûr nebatan jî bişewitîne, tewra yên ku di warê taksonomî de ji wan dûr in wek daffodil, sosin, ginseng, aspen, û behîv (Table 1). Xuya ye, gelek nebatên çolê û bexçe dikarin ji bo I. crassa bibin rezervan. Ya jorîn destnîşan dike ku dema ku tedbîrên parastinê têne pêşve xistin, pêdivî ye ku meriv îhtîmala zirara çîpên kartol ji hêla vê fungusê ve were hesibandin. Amadekariyên ku bi berfirehî têne bikar anîn ji bo dermankirina boriyên kartol, ku fludioxonil, azoxystrobin û difenoconazole hene, li dijî I. crassa bandorek fungicidal a bilind nîşan dane.
Xebat ji aliyê Weqfa Rûsî ya ji bo Lêkolînên Bingehîn ve hat piştgirî kirin (grav No. 20-016-00139).
Gotar di kovara "Bulletin of Plant Protection", 2020, 103(3) de hate weşandin.